Group zasad do projekcji badań BiFC jako BiFC – w tym, co jest oparte na publikacjach między fluorescencyjnymi segmentami białko – lub w programach.

Zasada BiFC

BiFC działania witryny o ujawnieniu kompleksu fluorescencyjnego, wyniku asocjacji dwóch segmentów białko fluorescencyjne, gdy jest bardzo blisko informacji białko-białko, w BiFC, Fluorofor áy ko zielbiel. Te wskazówki są połączone tylko w dwóch białkach. Kiedy te dwa słowa oddziałują na siebie, oba segmenty ponownie łączą się w wyniku ponownego tworzenia fluoroforu i fluorescencji, w którym to miejsce ma miejsce.

Grupa Regrów projektu BiFC

BiFC – oparte na publikacjach między fluorescencyjnymi segmentami białkowymi – lub w doświadczeniach. Analizy BiFC uwzględniają test, który jest wytwarzany w taki sposób, że poprawienie wszystkich parametrów, które mają wpływ na dwa fluorescencyjne segmentów białkowych. Lub proces testowy, w tym:

Kalibracja BiFC

Kalibracja BiFC przeprowadzona w czterech fazach w sklepie internetowym sposób:

Wybór odpowiedniego fluoroforu, który suplement doskonale się jako siedziba Partnerzy BiFC. Przykładami są dwa fluorofory, tylko białko VĂnus i fluorescencyjna yellow (YFP). Znakowanie daje prawo, w których segmenty BiFC i połączone z końcami aminowymi lub karboksylowymi dają wybrane białko. Okrealne rozplanowanie transfekcji przed głowami wielu mutantów. Określenie§Гo dni przesuwa się, ocorreme występuje w lokalizuje dni dzięki dodaniu segmentów BiFC.

Poszycie komórek i transfekcja

Proces Neste, jako Battery tylko początkowo fornirowany w płyta szklanej oraz w dwóch kawałkach z 6-częściowej płyty i dopuszczalny tylko w czasie night at pokojową temperature. DNA stack – przygotowany w całości do obróbki transfekcyjnej. Ze wgendędu na proces transfekcji łączy się w pachwinach i inkubuje w tłumaczeniu dla kilku godzin. W środku transfekcji tylko usunięto i inkubowano raz w stanie z hali.

Przygotowanie do akumulatorów na placu budowy w okresie laktacji

Proces ten, jak battery only analysis, początkowo przy użyciu epifluorescencyjnego mikoskopu a mikroskop w celu sprawdzenia jego fluorescencji. Tak więc przygotowanie akumulatorów odbywa się poprzez dodanie paraformaldehydu po kwalifikowaniu się jako akumulatory lizowany w celu uzyskania obrazu.

Obrazowanie baterii

Intensywność fluorescencji Г © oznaczona dla każdej pojedynczej pilhy. Analiza Selektywna BiFC sinusów – ilustracja lub transfekcję razem z CFP lub. Obraz karmienia piersią za pomocą mikoskopu konfokalnego.

Fluorescencyjne oznaczanie ilościowe

Pomiar intensywności fluorescencji obrazu w okresie laktacji.

Przeanalizuj dwie kości

Jako wyniki uzupełnia z określaniem fluorescencji fluorescencji określanie wartości definitywnych złuszczania złuszczania warunkowego na intensywność uzupełnienie z fluorescencji i intensywności keks wosa fluorescencyjnego.

Przewidywane na podstawie wielokolorowego doświadczenia BiFC

Wielobarwne doświadczenie BiFC obejmuje Kombičję substytucyjne ciał stałych oraz dwa segmenty białek fluorescencyjnych, które obejmują kompostowi różne kolory. Kolejny laencial laktacyjny obraz – rozważ włosy wizualizują dwa komposty, które owijają komposty fali, różny od emisji i wzbudzenia. Wyobraź sobie laktowanie dwóch kompostów jest alternatywnie, zapobiegać ponownej lokalizacji jednego lub drugiego kompleksu na podstawie czasu pośredniego na przeciągu laktacji dwóch kompostów.

Ponieważ intensywność intensywności fluorescencji musi być utrzymywana na fundamencie, aby zapobiegać rozwojowi rozwoju rozkładów rozkładów spowodowanych praniem w zależności od signal-à-tilt. Różnice między dwoma fluoroforami można łatwo skorygować obrazem mleka, które reprezentują grupę białek. В 

Wielokolorowy BiFC został ustalony wybór badań na badania naukowe, w użytkowaniu kilku ł queczyçà z YFP i CFP. Maszyna BiFC na podstawie zbadania wzüdnej wydajności wyników dwóch bFos z bJun i bATF2.a-cardin ile kosztuje

Oprócz wielokolorowej metody BiFC dla baterii roślinnych, bada uszkodzenia, aby ujawnić symulti-dię alternatywnych kompleksów nie roślinnych białek / kinaz sensorowych.

Aplikacja testowa BiFC

W ten sposób aplikacje BiFC obejmują obraz mlekowy rozkład dwóch kompostów w stanie ustalonym, opracowany przez zgrupowanie białek w różne typy puchu i organizmów. Wykluczenia na niemowlę wyobrażenie interwencji między porównaniem białkami w stosie, że zmienia się, które dostarczają dodatkowe informacje na temat technologii biologicznych biologicznych składnikznych.

Jest równie równie równie równie przydatne przy identyfikowaniu çà dwa różne segmenty białek, które łączą się poprzez interakcję między białkami, które są połączone razemczone zawierającym. W ramach eksperymentu BiFC tylko w równym stopniu Г przydatny w okreslono na podstawie topologii proteiny błonowej oraz na podstawie wysokiej inspekcji z oraz z sada entry of small molecular effects, którą kompostujemy z kowalstwem.

Źródła

Dalsze czy Anuluj

Ostatnia Aktuellizacja: 26 lutego 2019 r

“https://www.news-medical.net/?tag=/BiFC”,”200″,”OK” “” https://www.news-medical.net/life-sciences/Bimolecular-Fluorescence- Uzupełnienie – (BiFC) – (francuski) .aspx “,” 200 “,” OK “,” Sprawdzone przez

Complementacja bimole culaire de fluorescence (BiFC) jest techniką jednoczy re cente utilisé i dans l’enquéte z bezpośrednio wizualizacją białko-białko (PPI) fonctionner to inté rieur des cellules en bref Organizmów z PPI seaux przed innymi istotami ludzkimi, vis sans fin, la levure, et centrals.

Ódródło: Karl Dupont / Shutterstock.com

BiFC jest główny pracownikiem znajdującym się w ogonie nazwy PPI; Przegląd jest równie skuteczną techniką w couvrant des proté ines neuves, jak i w fournissant des information nouvelles sur des fonctionnements de protéine.

Książę BiFC

Prince de fonctionnement de BiFC już oparty in le veloppement d’un fluorescent composition, en raison de la Association deux segment d’une proté ine fluorescent when ils sont dans la grande proximité z powodu protéine-proté ine les clats , c.-ª -d., Dans BiFC, a fluorofor się w aminokwasy końcowe i karboksylowe. Ces extré mité without okres is dans deux protéines. Kiedy ces deux protéines agissent każdy sur the authre, les deux les segmentes rassocient ayant pour re sultat la réré du fluoroforu i tworzenie miejsc fluorescencyjnych pomocniczych powierzchni przylegającej.

Zespół smyczkowy dla Concevoir BiFC

Eksperymenty BiFC – zawieszka oparta na segmentacji białek fluorescencyjnych białek – w pewnych okolicznościach. Analizy BiFC red nieanalizy, kto produkuje telle manière qu’elle odpowiada, czy tous les les paramĂtres dotyczy Stowarzyszenia z segmentu fluorescents de protéine. Analizy za produkcji:

Г ‰ talonnage firmy BiFC

Kombinezon BiFC talonnage est effectuĂ © dans quatre é tapes:

Choix de fluorophore nadaje si tutaj fonctionne finement jako partnerrzy w syntezie BiFC. Przykłady fluoroforów na Venus et protéine fluorescente jaune (YFP). Oznaczenie białko w lesquelles segmenty BiFC to collé s sur l’aminé lub les carboxylicique-terminale de la proteé ine se e. Zapewnij przerwanie przerwania transfekcji, a także kontrolę wielu mutantów. Zakończono modyfikację, jeśli jest wytwarzany w localizacji kosztów za ochronę, to ajout segmentu BiFC.

Transfekcja plaque et de cellules

W tym procesie proces ogniwa rozpoczynający się od płytek w podstawie w blaszce verre et dans deux puits d’un 6 puits et alorsa dopuszcza się aranżer du jour au lendemain o temperature tempoczenia. Alors komórki DNA są dostępne do procesu transfekcji. Pod koniec procesu transfekcji transfekcji tektury się i galement et alors inkubuje w progresji. Pończochy transfekcyjne przechowuje się na emeryturze i inkubuje od nouveau „tat de chambre”.

Przygotowanie komórek do reprezentacji

W procesie tym komórki są analizowane przy użyciu mikoskopu epifluorescencyjnego fluorescencji afin de vé rifier leur. Następnie możliwe jest przygotowanie komórek from dodania paraformalé hyde aprés, ke komórki są dostępne tylko z uzyskania obrazu.

Reprezentacja cellules

Intensywność fluorescencji kończy się i wylewa komórki chaque. Przeanalizuj lectrice des signes de BiFC ponownie wygładzony i skuteczny w transfekcji z PCP. Reprezentacja jest uczciwa, gdy używa się konfokalnego mikoskopu.

Ocena ilościowa fluorescencji

Miara intensywności fluorescencji fait utilisant des plusieurs logiciel de repéprémentation.

Analyze des charactĂ © ristiques

Odwzorowanie kompementacji fluorescencji do zakończenia o wartości napotkanej na działach uzupełnienia fluorescencji i intensywności fluorescencyjnych komórek protéine en jacket.

Modé d’expé rience in couleurs by BiFC

Doświadczenie w pracy w BiFC Polskie w stowarzyszonych substitutional et des segmentach fluorescencyjnych białek qui fournissent des composés z różnymi zespołami couleur. Representation sequentiel est réalisé i para the visuisation of composition problematic des longueurs d’where specifices d’é mission et d’excitation. Reprezentacja kompozytora est faite alternativement pour é viter, czyli ponowna Lokalizacja jednego lub drugiego kompozytora basic sur le retard między reprezentacją kompozytora.

Intensywność kontynuacji kontynuacji fluorescencji ГЄtre mises Г jour jest wielkością continuelle afin d’Ă © viter, prędkośćą wariacji dystrybucji prowokuje par variation dans le rapport de signe-Ă -moumouvement propre. Les bruits entre deux fluorophores peuvent é galement Ătre rectificaciones de reprezentacji komórek reprezentujących grupę białek. В 

BiFC en couleurs à té © dé finishé premier było później z komórkami mammifres dans les Études, które są stosowane przez YFP i PCP. BiFC s’arrange pour examiner na themat kierunków bFos z bJun i bATF2.

Ulepszenie metody w BiFC couleurs leje komórki ze środka dans l’enquéte południe daje symultaniczne przyspieszenie alternatywnych materiałów tecteur / proté ine kinase de Calc dans le plant.

Zastosowania analizy BiFC

Zastosowania BiFC, z repreprycją dystrybucji, przez równowaga i skład zasłony z grupowania protectów w różnych typach komórek i organizmów. He active jest galementem reprezentacji między kwotami proté ines dans jednoczy komórki en plus de l’alté ration dans les covalent ines protein qui fournissent les information complementaires au subjet des procédé s biologiques des composées de proteécé qui récent produits.

Jest to potrzebne w identyfikacji różnych segmentów protéine tutaj peuvent étre linked for interferencji między proté ines, które są collé sur les segmentami składającymi się z ОІ-galaktozydazy, l „ubikwityny i redurofolktazy. Doświadczenia BiFC to tylko ok topślaniu topologii białek błonowych i inspekcji poziomów wejść i klasy molekularnych białek białek na kompozytach białkowych.

Źródła

Dalsze czy Anuluj

Ostatnia Aktuellizacja: 26 lutego 2019 r

„Https://www.news-medical.net/life-sciences/Bimolecular-Fluorescence-Complementation-(BiFC)-(Spanish).aspx”,”200″,”OK”, „Sprawdzone przez

Bimolekularnym uzupełnieniem fluorescencji (BiFC) jest herbata stosowana ostatnio w śledzaci6n oraz bezpośrednia wizualizacja informacji białko-białko (PPI) oraz wzajemne działanie między białiek ayny miyami Identyfikacja tych określeń podsumowanie Twojej pracy wewnątrz komórek. Organizmy z sieciami PPI obejmują ludzi, świdry, drożdże i rośliny.

Ódródło: Carl Du Pont / Shutterstock.com

BiFC, jest zezwolenie na badania w badaniach kotwic genomu nad IPP; Jeśli określi, jak jest skuteczny w odkryjemy nowe interakcje proteiny i zaoferuję nowe informacje o funkcjach kowalskich.

Zasada BiFC

Zasada działania BiFC produkuje się w ujawnieniu fluorescencyjnego dopełniania dopełniającego w wyniku połączenia dwóch segmentów przewagi fluorescencyjnej, zlokalizowane w pobliżu bliskości wtórnego działania BiFC, to znaczy fragmentów Białka rozszczepionego w białko BiFC, fragmentu podzielonego Białka w końcachacza aminowych karboksylowych i. Te skrajności łączą się w dwa kowalskie. Kiedy te dwa białka wejścia w interakcję, dobrze segmenty łączą się ponownie, co skutkuje odtworzeniem fluoroforu i fluorescencji w miejscu interfejsu.

Zestaw regul projektowych BiFC

Eksperymenty z BiFC – w międzyczasie, które opierają się na wzajemnym działaniu segmentów białek fluorescencyjnych – zwrot tylko w każdym programie. Analizy BiFC odpłatną w taki sposób, aby uzyskać wszystkie parametry, które wpływają na asocjacje fluorescencyjne segmentów białek. Procedura wykonania analizy zawierającej:

Kalibracja BiFC

Kalibracja BiFC czeka się w poczęstunku po scenariuszu:

Dobór odpowiedniego fluoroforu działającego jako partnerrzy syntezie BiFC. Przykładami fluoroforów są Wenus i żółte białko fluorescencyjne (YFP). Oznaczanie, z BiFC tworzenie segmenty, cz i rozważanie z analizy aminowej cz i końcowa karboksylowymi. Określenie ekonomicznych warunków transfekcji przed badaniem wielu mutantów. Określenie zmian zachodzących w lokalizacjach białek z powodu dodania segmentów BiFC.

Transfekcja laminatu i komórek